Сифилис
Страница 42

Срок годности для исследования высушенной сыворотки 5 дней с момента приготовления в южных районах нашей страны или в жаркое время года и 10 дней – в остальных регионах. Сыворотка нативная, хранящаяся в холодильнике при температуре +3…+5°С, также теряет свою активность.

В качестве антигена применяют взвесь бледных трепонем из ран­него орхита кролика, зараженного сифилисом, обычно штаммом Никольса. Для заражения следует брать совершенно здоровых кро­ликов-самцов массой 2-2,5 кг, предварительно исследовав у них кровь на реакцию Вассермана. Отбирают только кроликов с отрица­тельными результатами серологических реакций. Заражение произ­водят внутрь яичка взвесью трепонем в количестве не менее 50-60 в поле зрения в объеме 0,50-0,75 мл. Непосредственно после зараже­ния кролику вводят внутримышечно 20 мг кортизона, а в последу­ющие дни – по 10 мг ежедневно. Рекомендуемое рядом исследова­телей одновременное рентгеновское облучение кроликов трудно для выполнения и не дает существенных преимуществ.

Для удаления яичка (при 6-8-дневном орхите) кролика привя­зывают к станку, обескровливают сердечной пункцией (некоторые предпочитают обескровливать через сонную артерию). Затем забива­ют кролика воздушной эмболией (введение 15 см3 воздуха в крае­вую вену уха). Яички выводят в мошонку путем поглаживания ла­донью по животу кролика сверху вниз. Поверхность кожи мошон­ки, предварительно немного подстриженной ножницами, смазыва­ют спиртом, поджигают, тут же тушат и опять поджигают. Этим достигаются освобождение кожи от шерсти и одновременно дезин­фекция кожи. После этого мошонку покрывают резиновой стериль­ной салфеткой с разрезом, через который выводят наружу яичко. Оператор фиксирует яичко одной рукой, а другой рукой делает скальпелем небольшой поперечный разрез кожи мошонки. Ножни­цами отрезают яичко от подлежащих тканей и помещают его в стерильную чашку Петри. Такого же рода манипуляцию проделыва­ют и с другим яичком. Далее ножницами удаляют придаток, осво­бождают яичко от жира и разрезают его на 10-15 кусочков. Готовят препарат с каплей изотонического раствора натрия хлорида и опре­деляют под микроскопом в темном поле наличие трепонем и их число. Все кусочки помещают в стерильную колбу объемом 50-75 мл, в которую уже налита среда (сыворотка кролика, разведенная 0,83 % стерильным раствором натрия хлорида, в количестве 10-14 мл на яичко). Колбу ставят в аппарат для встряхивания на 20-30 мин. После этого все содержимое выливают в большую стерильную центрифужную пробирку и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин для удаления плотных кусочков тканей. Затем надосадочную жидкость сливают и готовят препараты для микроскопии. Определяют число трепонем в темном поле зрения (окуляр 10, объек­тив 40). Если число трепонем большое, то взвесь следует развести, чтобы было по 10-15 трепонем в поле зрения, так как при большем их числе трудно подсчитывать иммобилизованные трепонемы.

Обычно в центрифужной пробирке над осадком оставляют не­которое количество жидкости и дают возможность немного ей постоять. Жидкостью, содержащей большое число трепонем, заража­ют кроликов для следующей постановки реакции. При каждой по­становке следует одновременно производить и заражение. Заражен­ных кроликов содержат в клетках в проветриваемом помещении при температуре +18…20°С. Пища кроликов должна содержать зна­чительное количество витаминов.

Для сохранения трепонем жизнеспособными предложено боль­шое количество различных сред (Овчинников Н. М., 1961).

Первоначально среда Нельсона была очень сложна. Затем Нельсон значительно упростил ее, но она все еще сложна. A. Bellone и М. Bonelli (1957) в качестве среды для сохранения трепонем применя­ют разведенную изотоническим раствором натрия хлорида сыворот­ку человека (2:1), а К. Meinike и К. Lagel (1959) – сыворотку кролика (2:1 или 1:1). Следует отметить, что трепонемы, взвешен­ные в одном изотоническом растворе натрия хлорида и особенно вместе с сывороткой больного и комплементом в небольшой дозе, выживают, судя по контрольным исследованиям, и без какой-либо среды, однако сроки их выживания значительно короче, подвиж­ность менее активна, и наблюдается значительное количество со­мнительных результатов.

Н.М. Овчинников (1961, 1962) предложил для РИБТ простую среду. Готовят 0,2% раствор пищевого желатина на 0,83 % растворе натрия хлорида. Раствор стерилизуют автоклавированием при тем­пературе 110°С в течение 10 мин, после чего добавляют стрептоми­цина сульфат из расчета 1:10000. Среда для опыта состоит из сыво­ротки кролика, разведенной 1:2 изотоническим раствором натрия хлорида, желатина и раствора человеческого альбумина. Альбумин готовят на изотоническом растворе натрия хлорида, стерилизуют фильтрацией через бактериальный фильтр (пригоден только сухой альбумин, лиофильно высушенный); каждый раз при употребле­нии новой серии следует испытать, параллельно со старой, новую серию. Весь запас ингредиентов хранится в обычном рефрижерато­ре.

Страницы: 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47

Смотрите также

Лечебные свойства зеленого чая
Зеленый чай уже употребляется на протяжении многих веков в Индии, Китае, Японии и Таиланде. В традиционной китайской и индийской медицине, практикующие использовали зеленый чай как стимулирующее, мо ...

ДЕТСКИЕ ИНФЕКЦИИ
Детские инфекционные болезни характеризуются высокой контагиозностью (заразностью), циклическим течением и способностью оставлять после себя стойкий (пожизненный) иммунитет. Следует подчеркнуть усл ...

Диета при сахарном диабете
При написании этой главы не ставилась цель предложить читателям примерное меню на месяц или неделю. Согласитесь, мало кто станет соблюдать диету, если пища не будет приносить удовольствия. У каждо ...

 
Copyright © 2010 www.medicus-amicus.ru. All Rights Reserved.