Сифилис
Страница 41

Реакция иммунофлюоресценции-абсорбции с бледной трепонемой (FTA-ABS). Используемый для реакции антиген представляет собой взвесь бледных трепонем из пораженных сифилисом яичек кроли­ка, фиксированную ацетоном на предметном стекле. Можно также использовать лиофилизированные бледные трепонемы после их восстановления в изотоническом растворе натрия хлорида. Инакти-вированную сыворотку инкубируют с сорбентом (трепонемы Рей­тера) для абсорбирован ия неспецифических групповых антител. За­тем сыворотку помещают пипеткой на антиген, находящийся на предметном стекле. Специфические антитела (глобулины) связыва­ются бледными трепонемами. После промывания ктрепонемам на предметном стекле добавляют комплекс античеловеческого глобу­лина с флюоресцентным красителем (флюоресцеин-изотиоцианат). Этот комплекс связывается с человеческим глобулином на оболоч­ке клеток бледных трепонем и может быть идентифицирован мето­дом флюоресцентной микроскопии. По прошествии не менее 2 ч по степени флюоресценции сыворотку можно классифицировать как нереактоспособную, пограничную или реактоспособную. Реакция, обозначаемая двумя плюсами или больше, свидетельствует об ин­фекции.

Появления реактоспособности можно ожидать примерно в нача­ле 3-й недели после заражения, а у нелеченных больных она обна­руживается постоянно. Сыворотка остается реактоспособной и через несколько лет после успешного лечения раннего сифлиса, а у боль­ных, получивших адекватное лечение при позднем сифилисе, – на протяжении десятилетий. Главными достоинствами реакции FTA-ABS являются довольно высокая специфичность и чувствительность, а также быстро наступающая реактоспособность. Положительная FTA-ABS может иметь решающее значение для диагностики в сомни­тельных случаях, особенно при положительных реакциях VDRL или автоматизированной реакции микрогемагглютинации (АМНА-ТР), используемых для скрининга (LugerA., 1981).

Реакция 19S IgM-FTA-ABS. При идентификации антител IgM к бледным трепонемам реакцией FTA-ABS с использованием конъюгата анти-IgM в качестве реагента выявлялись ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Реакция 19S IgM-FTA-ABS в этом отношении является наиболее точным, специфичным мето­дом. В целях отделения крупных молекул 19S IgM от более мелких молекул 7S IgM используется методика ультрацентрифугирования, адсорбирования на белке А и гель-фильтрация с применением уль­трагеля АсА 34 с трисбуфером при рН 8,0 на колонке К 26/100 при объеме геля 300 мл, скорости потока 27 мл/ч и температуре 240 С. В этой системе первый пик элюата содержит фракцию 19S IgM. В процессе фильтрования отделяются непрочные иммунные комплек­сы. Использование фракции 19S IgM в реакции FTA-ABS обеспечи­вает высокую специфичность, устраняя возможность неспецифи­ческих, ошибочных результатов.

Реакция иммобилизации бледных трепонем.

Основное назначение РИБТ – распознавание ложноположительных результатов при постановке стандартных серологических реак­ций. Это особенно важно у больных, у которых отсутствуют клини­ческие проявления активного сифилиса или имеются поражения внутренних органов или нервной системы. Неоценима роль этой ре­акции для распознавания ложноположительных результатов стан­дартных серологических реакций у беременных, где от результата РИБТ фактически зависит судьба (здоровье) ребенка.

Сущность реакции заключается в потере подвижности бледными трепонемами в присутствии иммобилизинов испытуемой сыворот­ки и активного комплемента. Реакция ставится в условиях анаэро­биоза. Техника выполнения самой реакции довольно сложна, по­этому она ставится в специальных лабораториях.

Иммобилизины появляются в сыворотке крови больных позднее, чем другие антитела, и, следовательно, РИБТ становится положи­тельной позже, чем стандартные серореакции и РИФ.

Оценка реакции: при иммобилизации до 20 % бледных трепонем реакция считается отрицательной; при иммобилизации от 21 до 50 % бледных трепонем – слабоположительной; при иммобилизации от 51 до 100% – положительной (оценка процента иммобилизации бледных трепонем производится по специальной таблице).

Положительный результат РИБТ наблюдается у больных с тро­пическими трепонематозами (пинта, беджель). Иногда РИБТ дает ложноположительный результат при саркоидозе, эритематозе, ту­беркулезе, циррозе печени, атеросклерозе и др. С возрастом пациен­тов число ложноположительных результатов РИБТ увеличивается.

Упрощенная методика РИБТ (Методика разработана проф. Н. М. Овчинниковым.). Кровь для получения сы­воротки берут из вены стерильно в сухую чистую и простерилизованную посуду. Больной перед взятием крови не должен принимать никаких лекарственных средств, которые могли бы оказать вредное влияние на подвижность трепонем; в частности, необходимо пре­кратить введение дюрантных препаратов пенициллина на срок воз­можной задержки его в организме. Инактивация сыворотки произ­водится в течение 30 мин при температуре 56 °С, а если сыворотка была инактивирована накануне, то в день постановки реакции ее прогревают в течение 10 мин. Никаких консервантов в сыворотку не добавляют. При необходимости длительного хранения сыворотку можно заморозить при –20 °С. Сыворотки, высушенные на воща­ной бумаге (с добавлением свежеприготовленного 40 % пищевого сахара по 3 капли на каждые 0,5 мл сыворотки), можно в отдель­ных случаях применять для исследования. Следует, однако, учиты­вать, что титр иммобилизинов снижается при высушивании сыво­ротки подобно реагинам и при невысоких титрах снижение может быть значительным. Поэтому не следует широко пользоваться в РИБТ высушенными сыворотками.

Страницы: 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46

Смотрите также

Заключение
Лечение собственной мочой и голодом справедливо и гуманно и более всего соответствует принципам естественного лечения (натуропатии). Заключается это в том, что заболевший человек осознает свои оши ...

Мочетерапия в конкретных случаях
Так как состав мочи зависит от патологического состояния человека, применение мочи показано при всех заболеваниях, за исключением травматизма или заболеваний, имеющих механическую природу. Это обс ...

Анализ пожарной опасности
В технологической схеме могут быть аппараты с горючими жидкостями, причем уровень жидкости может изменяться при наполнении или расходе продукта. Могут быть аппараты, полностью заполненные жидкостью ...

 
Copyright © 2010 www.medicus-amicus.ru. All Rights Reserved.